TRPC6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401205

Übersicht

TRPC6 kodiert einen nichtselektiven Kationenkanal aus der Familie der „transient receptor potential canonical“-Kanäle, der einen rezeptorvermittelten Ca²⁺-Einstrom an der Plasmamembran vermittelt. Die Kanalaktivität ist häufig an PLC-gesteuerte Signalwege gekoppelt, die nachgeschaltet von GPCRs und Rezeptor-Tyrosinkinasen liegen, und formt die zytosolische Ca²⁺-Dynamik, die Transkriptionsantworten, zytoskelettales Remodeling und Zellmotilität reguliert. In menschlichen Geweben trägt TRPC6 zu mechanosensitivem und diacylglycerol-abhängigem Calciumeinstrom bei und bindet nachgeschaltet Signalwege wie Calcineurin–NFAT und MAPK ein. Eine dysregulierte TRPC6-Funktion wird mit der Podocytenbiologie der Niere und Mechanismen glomerulärer Erkrankungen sowie mit kardiovaskulären und neuroinflammatorischen Prozessen in Verbindung gebracht, was seine Eignung als Ziel zur Signalweg-Analyse in zellbasierten Modellen unterstreicht.

Das TRPC6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TRPC6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TRPC6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TRPC6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TRPC6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TRPC6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TRPC6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TRPC6-Exone abzielen, die für die TRPC6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TRPC6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TRPC6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TRPC6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TRPC6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TRPC6 HDR-Plasmid (h) und TRPC6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TRPC6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TRPC6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.