Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRPC6 (h): sc-401205

Présentation

TRPC6 code un canal cationique non sélectif de la famille des canaux TRP canoniques, qui médie l’entrée de Ca²⁺ opérée par les récepteurs au niveau de la membrane plasmique. L’activité du canal est généralement couplée à une signalisation dépendante de la PLC en aval des GPCR et des récepteurs à activité tyrosine kinase, modulant la dynamique du Ca²⁺ cytosolique qui régule les réponses transcriptionnelles, le remodelage du cytosquelette et la motilité cellulaire. Dans les tissus humains, TRPC6 contribue à une entrée de calcium mécanosensible et répondant au diacylglycérol, avec l’activation en aval de voies telles que la signalisation calcineurine–NFAT et MAPK. Un dysfonctionnement de TRPC6 a été impliqué dans la biologie des podocytes rénaux et les mécanismes des maladies glomérulaires, ainsi que dans des processus cardiovasculaires et neuro-inflammatoires, ce qui en fait une cible utile pour disséquer des voies de signalisation dans des modèles cellulaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRPC6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TRPC6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TRPC6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TRPC6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRPC6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TRPC6 pour l'étude de la signalisation de TRPC6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TRPC6 essentiels à la fonction de TRPC6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TRPC6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TRPC6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TRPC6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TRPC6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TRPC6 plasmide HDR (h) et le TRPC6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TRPC6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TRPC6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.