Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRPC3/6/7 (h): sc-403740

Présentation

TRPC3 est un canal cationique non sélectif perméable au Ca²⁺, appartenant à la sous-famille TRPC3/6/7, qui couple la signalisation de la phospholipase C activée par les récepteurs à la dépolarisation membranaire et à l'entrée de calcium intracellulaire. L'activité du canal est régulée par le diacylglycérol et intègre des signaux en aval des GPCR et des voies des récepteurs à activité tyrosine kinase, modulant la transcription dépendante du Ca²⁺, le remodelage du cytosquelette, la sécrétion et la contractilité. Des complexes de canaux contenant TRPC3 contribuent à l'excitabilité neuronale et à la signalisation synaptique, ainsi qu'à l'homéostasie du calcium dans le muscle lisse et le cœur via un dialogue avec les voies calcineurine/NFAT et MAPK. Un dysfonctionnement de l'axe TRPC3/6/7 a été associé à une signalisation calcique aberrante dans des contextes de maladies cardiovasculaires et neurodégénératives, et il est fréquemment étudié dans des modèles d'hypertrophie, de fibrose et de stress excitotoxique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRPC3/6/7 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TRPC3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TRPC3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TRPC3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRPC3/6/7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TRPC3 pour l'étude de la signalisation de TRPC3/6/7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TRPC3 essentiels à la fonction de TRPC3/6/7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TRPC3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TRPC3/6/7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TRPC3/6/7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TRPC3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TRPC3/6/7 plasmide HDR (h) et le TRPC3/6/7 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TRPC3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TRPC3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.