TRPC3/6/7 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403740

Descripción general

TRPC3 es un canal catiónico no selectivo, permeable al Ca2+, de la subfamilia TRPC3/6/7, que acopla la señalización de la fosfolipasa C activada por receptores con la despolarización de la membrana y la entrada de calcio intracelular. La actividad del canal está regulada por el diacilglicerol e integra señales aguas abajo de vías de GPCR y de receptores tirosina cinasa, modulando la transcripción dependiente de Ca2+, la remodelación del citoesqueleto, la secreción y la contractilidad. Los complejos de canales que contienen TRPC3 contribuyen a la excitabilidad neuronal y a la señalización sináptica, así como al manejo del calcio en músculo liso y corazón mediante la comunicación cruzada con las vías de calcineurina/NFAT y MAPK. La desregulación del eje TRPC3/6/7 se ha vinculado con una señalización aberrante de Ca2+ en contextos de enfermedad cardiovascular y neurodegenerativa, y se estudia con frecuencia en modelos de hipertrofia, fibrosis y estrés excitotóxico.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TRPC3/6/7 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TRPC3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TRPC3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TRPC3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TRPC3/6/7.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TRPC3 para la investigación de la señalización de TRPC3/6/7, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TRPC3 críticos para la función de TRPC3/6/7
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TRPC3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TRPC3/6/7 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TRPC3/6/7 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TRPC3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TRPC3/6/7 (h) y el plásmido HDR TRPC3/6/7 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TRPC3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TRPC3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.