tropomodulin 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423427

概要

マウスTmod1は、アクチンフィラメントのマイナス端（pointed end）をキャップするタンパク質であるトロポモジュリン1をコードしており、トロポミオシンと協調して、分化した細胞骨格ネットワークにおけるフィラメントの安定化と長さの規定に寄与します。マイナス端でのアクチンサブユニット交換を制限することで、Tmod1は筋原線維の組織化、膜近傍のアクチン構築、ならびに張力依存的な細胞リモデリングに関与します。これらの機能により、Tmod1はアクチン細胞骨格ダイナミクス、サルコメア形成、細胞形状制御を司る経路の中に位置づけられます。アクチンフィラメント安定性の制御異常は、筋構造や収縮機能障害の研究に広く関連するだけでなく、細胞運動性やメカノバイオロジーにおける細胞骨格の寄与を理解する上でも重要です。

tropomodulin 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTmod1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tmod1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tmod1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、tropomodulin 1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、tropomodulin 1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tmod1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• tropomodulin 1の機能に不可欠なTmod1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tmod1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• tropomodulin 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびtropomodulin 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tmod1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  tropomodulin 1 HDRプラスミド（m）および tropomodulin 1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTmod1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTmod1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。