Particules Lentivirales d'Activation (h) TrkB: sc-400142-LAC

NTRK2 code le récepteur tyrosine kinase TrkB, un récepteur de neurotrophines à haute affinité pour le BDNF et NT‑4/5, qui régule la survie et la différenciation neuronales, la plasticité synaptique et le remodelage des circuits dépendant de l’activité. Après liaison du ligand, TrkB active les cascades de signalisation canoniques PI3K–AKT, RAS–MAPK/ERK et PLCγ–Ca2+, coordonnant des programmes transcriptionnels et la dynamique du cytosquelette qui façonnent la croissance des neurites et la fonction synaptique. Une dérégulation de la signalisation NTRK2/TrkB a été associée à des altérations du neurodéveloppement et à des phénotypes neuropsychiatriques, et une activité ou une expression aberrantes du récepteur ont été étudiées dans des cancers impliquant la voie des neurotrophines. En tant que nœud intégrant les signaux extracellulaires des neurotrophines aux voies de signalisation intracellulaires à activité kinase, TrkB est largement utilisé pour étudier les interactions entre voies, la connectivité neuronale et des sorties de signalisation spécifiques au contexte dans des modèles cellulaires humains.

Les particules d'activation lentivirales TrkB (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NTRK2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TrkB (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NTRK2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TrkB. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NTRK2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.