Plasmide CRISPR/Cas9 KO TrkB (m): sc-421983
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- TrkB Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique TrkB, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TrkB Antibody (F-1): sc-377218
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO TrkB (m) | sc-421983 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Ntrk2 code le récepteur tyrosine kinase TrkB, un récepteur à haute affinité du BDNF et de NT-4/5 qui régule la survie neuronale, la différenciation et la plasticité synaptique. Après liaison du ligand, TrkB active les cascades de signalisation canoniques PI3K–AKT, MAPK/ERK et PLCγ–Ca²⁺, qui relient les signaux extracellulaires des neurotrophines à des programmes transcriptionnels et cytosquelettiques. La signalisation dépendante de TrkB influence la croissance des neurites, le remodelage des épines dendritiques et l’affinement des circuits dépendant de l’activité dans le système nerveux en développement et à l’âge adulte. Une activité altérée de la voie Ntrk2/TrkB a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques ainsi qu’à des processus neurodégénératifs, ce qui confirme sa large pertinence dans des modèles de maladies axés sur les mécanismes.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TrkB (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ntrk2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ntrk2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ntrk2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TrkB.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ntrk2 pour l'étude de la signalisation de TrkB, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Ntrk2 essentiels à la fonction de TrkB
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ntrk2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le TrkB plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TrkB plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ntrk2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le TrkB plasmide HDR (m) et le TrkB (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ntrk2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ntrk2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.