Plasmide CRISPR d'Activation (h) TREM-2: sc-401585-ACT

TREM2 code le récepteur déclencheur exprimé sur les cellules myéloïdes 2 (TREM‑2), un immunorécepteur principalement exprimé dans la microglie et d’autres lignées myéloïdes, qui module la détection immunitaire innée, la phagocytose et la gestion des lipides. En s’associant à l’adaptateur TYROBP/DAP12, TREM‑2 transmet des signaux via des voies dépendantes de SYK, influençant la production de cytokines, la chimiotaxie, la survie et la reprogrammation métabolique lors de la surveillance des tissus. Dans le système nerveux central, TREM‑2 contribue aux réponses microgliales aux débris cellulaires et aux protéines agrégées, ce qui l’associe à des processus neuro-inflammatoires et à des mécanismes de risque impliqués dans les maladies neurodégénératives. Une signalisation TREM‑2 dérégulée est également étudiée dans la polarisation des macrophages et la biologie des cellules myéloïdes associées aux tumeurs, soutenant des travaux de recherche axés sur les voies dans l’inflammation et la régulation immunitaire.

TREM-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TREM2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TREM-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TREM2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TREM2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TREM-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TREM2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TREM-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TREM-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de TREM2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.