Plasmide CRISPR d'Activation (m) TREM-1: sc-425490-ACT

Le gène murin *Trem1* code TREM-1, un immunorécepteur de la famille TREM exprimé principalement par les cellules de la lignée myéloïde, telles que les neutrophiles et les monocytes/macrophages. Par son association avec l’adaptateur TYROBP/DAP12 et une signalisation en aval dépendante des ITAM, TREM-1 amplifie les réponses inflammatoires, favorisant la production de cytokines et de chimiokines et modulant l’activation de l’immunité innée. La signalisation TREM-1 recoupe celle des voies des récepteurs de reconnaissance de motifs, notamment les réponses médiées par les récepteurs Toll-like, afin de moduler le recrutement leucocytaire, la dégranulation et le niveau d’inflammation tissulaire. Une activité dérégulée de TREM-1 a été associée à une inflammation excessive dans des contextes infectieux et d’inflammation stérile, faisant de *Trem1* une cible pertinente pour des études mécanistiques de l’immunopathologie pilotée par les cellules myéloïdes.

TREM-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Trem1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TREM-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Trem1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Trem1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TREM-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Trem1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TREM-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TREM-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Trem1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.