Particules Lentivirales d'Activation (h) TRB-1: sc-405781-LAC

TRIB1 (TRB-1) code une protéine adaptatrice pseudokinase qui module la signalisation MAPK et les programmes transcriptionnels en servant d’échafaudage aux interactions protéine–protéine et en influençant la dégradation, dépendante du protéasome, de régulateurs de la signalisation. Dans des contextes immunitaires et métaboliques, TRB-1 participe à des voies associées à la signalisation inflammatoire, à la différenciation myéloïde et à l’homéostasie lipidique, en intégrant des signaux qui influencent l’état cellulaire et les réponses au stress. Une expression altérée de TRIB1 a été associée à des programmes hématopoïétiques dérégulés et à des traits cardiométaboliques, ce qui en fait une cible utile pour disséquer des réseaux transcriptionnels et de signalisation dépendants du contexte. Les études fonctionnelles s’appuient fréquemment sur la perturbation de TRB-1 pour relier des signaux en amont à des modifications de l’expression génique en aval et à des lectures phénotypiques telles que la prolifération, la différenciation et les réponses aux cytokines.

Les particules d'activation lentivirales TRB-1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TRIB1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TRB-1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TRIB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TRB-1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TRIB1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.