Plasmide CRISPR d'Activation (h) TRB-1: sc-405781-ACT

TRIB1 (TRB-1) humain est une pseudokinase catalytiquement inactive qui agit comme échafaudage, régulant la transduction du signal et le renouvellement des protéines, notamment via des interactions avec des modules MAPK et des ligases ubiquitine telles que COP1. En modulant les sorties de signalisation dépendantes de la phosphorylation et la stabilité de régulateurs transcriptionnels clés, TRIB1 influence la prolifération cellulaire, la différenciation et les programmes de réponse au stress. Les réseaux dépendants de TRIB1 sont impliqués dans la régulation immunitaire et inflammatoire ainsi que dans l’homéostasie du métabolisme lipidique, et une expression dérégulée a été associée à la biologie des hémopathies malignes et à des traits de maladies cardiométaboliques. Ces caractéristiques font de TRIB1 une cible utile pour disséquer l’architecture des voies de signalisation et le contrôle des états transcriptionnels dans des modèles cellulaires humains.

TRB-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TRIB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TRB-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TRIB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TRIB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TRB-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TRIB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TRB-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TRB-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TRIB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.