Plasmide CRISPR/Cas9 KO translin (m): sc-423528

Présentation

Le gène murin **Tsn** code la transline, une protéine conservée capable de se lier à l’ARN et à l’ADN, qui forme un complexe hétéromérique avec trax (TSNAX) et participe à la régulation post-transcriptionnelle de l’expression génique. La transline a été associée au transport et à la stabilité des ARN, à la maturation des microARN via le complexe nucléase C3PO, ainsi qu’à la modulation de la traduction localisée dans des contextes neuronaux et de cellules germinales. Par ces activités, TSN influence la signalisation en réponse au stress et des programmes d’expression génique qui façonnent la prolifération et la différenciation cellulaires. Des altérations des réseaux de régulation des ARN associés à TSN ont été impliquées dans des phénotypes neurocomportementaux et dans la régulation du métabolisme, faisant de **Tsn** un locus utile pour disséquer des mécanismes médiés par l’ARN dans des modèles pertinents pour l’étude des maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO translin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tsn dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tsn, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tsn à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine translin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tsn pour l'étude de la signalisation de translin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tsn essentiels à la fonction de translin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tsn pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le translin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le translin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tsn. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le translin plasmide HDR (m) et le translin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tsn pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tsn définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.