Plasmide CRISPR/Cas9 KO TPD52 (m): sc-423477

Présentation

Tpd52 code la protéine tumorale D52 (TPD52), un régulateur conservé du trafic membranaire et de la dynamique de la voie sécrétoire, qui influence le transport vésiculaire, l’exocytose et la distribution des protéines à la surface cellulaire. Dans les cellules de souris, l’activité de TPD52 a été associée à des processus soutenant la croissance et le remodelage cellulaires, notamment la coordination des compartiments membranaires intracellulaires et des sorties de signalisation liées aux fonctions des cellules épithéliales et immunitaires. Une expression dérégulée de TPD52 a été rapportée dans de multiples contextes liés au cancer, où des altérations du trafic et de la sécrétion peuvent affecter la prolifération, la migration et l’adaptation métabolique. Ainsi, Tpd52 est couramment étudié dans des modèles de biologie tumorale et de plasticité des états cellulaires afin de déterminer comment le transport membranaire s’articule avec des programmes de signalisation oncogéniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TPD52 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tpd52 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tpd52, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tpd52 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TPD52.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tpd52 pour l'étude de la signalisation de TPD52, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tpd52 essentiels à la fonction de TPD52
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tpd52 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TPD52 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TPD52 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tpd52. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TPD52 plasmide HDR (m) et le TPD52 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tpd52 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tpd52 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.