Plasmide CRISPR/Cas9 KO TorsinA (m): sc-424414
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- TorsinA Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique TorsinA, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TorsinA Antibody (D-7): sc-373915
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO TorsinA (m) | sc-424414 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Tor1a code la torsineA, une ATPase de la famille AAA+ qui se localise au réticulum endoplasmique et à l’enveloppe nucléaire, où elle contribue à l’intégrité de l’enveloppe nucléaire, à la protéostasie et au remodelage associé aux membranes via des interactions avec LAP1 et LULL1. Dans les cellules de souris, l’activité de la torsineA est liée à la régulation du transport nucléocytoplasmique, aux réponses au stress du réticulum endoplasmique et au contrôle qualité des protéines mal repliées. La perturbation de la fonction de TOR1A est associée à des dysfonctionnements neuronaux et à des phénotypes liés à la dystonie, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie des circuits moteurs et de l’adaptation cellulaire au stress. Tor1a est également utilisé comme locus modèle pour étudier comment des perturbations de l’enveloppe nucléaire influencent le couplage avec le cytosquelette et le trafic intracellulaire.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TorsinA (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tor1a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tor1a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tor1a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TorsinA.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tor1a pour l'étude de la signalisation de TorsinA, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Tor1a essentiels à la fonction de TorsinA
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tor1a pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le TorsinA plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TorsinA plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tor1a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le TorsinA plasmide HDR (m) et le TorsinA (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tor1a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tor1a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.