TOM40 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400967

Descripción general

TOMM40 codifica TOM40, la subunidad de β-barril formadora de poro de la translocasa de la membrana mitocondrial externa (TOM), un complejo que media el reconocimiento y la importación de proteínas mitocondriales codificadas en el núcleo. Al controlar la translocación de precursores hacia el interior de la mitocondria, TOM40 sustenta la fosforilación oxidativa, la proteostasis mitocondrial y las vías de control de calidad sensibles al estrés, incluida la mitofagia. Las alteraciones en la función o la expresión de TOMM40 pueden perturbar la bioenergética mitocondrial y favorecer la acumulación de proteínas mal localizadas, vinculando los defectos de importación mitocondrial con mecanismos de enfermedades neurodegenerativas y metabólicas. La variación genética en el locus TOMM40 se ha estudiado en relación con fenotipos asociados al envejecimiento y el riesgo de enfermedad neurológica, lo que motiva investigaciones mecanísticas en modelos celulares relevantes.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TOM40 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TOMM40 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TOMM40 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TOMM40 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TOM40.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TOMM40 para la investigación de la señalización de TOM40, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TOMM40 críticos para la función de TOM40
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TOMM40 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TOM40 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TOM40 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TOMM40. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TOM40 (h) y el plásmido HDR TOM40 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TOMM40 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TOMM40 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.