Plasmide CRISPR d'Activation (h) TOB1: sc-402842-ACT

Le gène humain **TOB1** code un membre anti-prolifératif de la famille **BTG/TOB**, qui module des programmes transcriptionnels contrôlant la progression du cycle cellulaire, la différenciation et l’apoptose. TOB1 agit comme un corégulateur transcriptionnel dépendant du contexte et s’interface avec des réseaux de signalisation tels que les voies **TGF-β/SMAD** et **MAPK**, contribuant à façonner l’expression génique en aval des signaux extracellulaires. En influençant la stabilité des ARNm et des complexes de répression/activation transcriptionnelle, TOB1 participe aux états d’activation des cellules immunitaires et, plus largement, au contrôle homéostatique de la croissance. Une expression dérégulée de TOB1 ou un déséquilibre de ses voies de signalisation a été associé à une altération de la fonction lymphocytaire et à des processus oncogéniques, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent en recherche en biologie du cancer et en immunologie.

TOB1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TOB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TOB1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TOB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TOB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TOB1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TOB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TOB1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TOB1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TOB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.