Plasmide CRISPR/Cas9 KO TNP1 (m): sc-423463

Présentation

Tnp1 code la protéine de transition 1 (TNP1), une protéine nucléaire basique exprimée au cours des stades tardifs de la spermatogenèse, qui remplace les histones dans les spermatides en cours d’allongement avant le dépôt des protamines. TNP1 favorise la condensation de la chromatine et l’empaquetage du génome pendant la spermiogenèse, contribuant à une mise en forme correcte du noyau et à la maturation des spermatozoïdes. L’altération de Tnp1 perturbe la transition histones‑protamines et peut entraîner une structure anormale de la chromatine spermatique ainsi qu’une diminution de la fertilité mâle dans des modèles murins. En tant que régulateur de la chromatine restreint aux cellules germinales, TNP1 est largement étudiée dans les voies impliquées dans la reprogrammation épigénétique, la compaction de l’ADN et la biologie de la reproduction.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TNP1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tnp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tnp1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tnp1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TNP1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tnp1 pour l'étude de la signalisation de TNP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tnp1 essentiels à la fonction de TNP1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tnp1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TNP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TNP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tnp1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TNP1 plasmide HDR (m) et le TNP1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tnp1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tnp1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.