Plasmide CRISPR d'Activation (h) TMPRSS11A: sc-415530-ACT

TMPRSS11A code une protéase à sérine transmembranaire de type II qui se localise à la surface cellulaire et participe à la protéolyse péricellulaire aux interfaces épithéliales. En clivant des substrats extracellulaires et associés à la membrane, TMPRSS11A peut influencer les programmes de différenciation épithéliale, le maintien de la barrière et les réseaux de signalisation activés par les protéases qui façonnent le remodelage tissulaire et les réponses inflammatoires. Son activité s’inscrit dans des cascades plus larges de protéases à sérine et peut moduler la disponibilité de peptides bioactifs et de signaux liés aux facteurs de croissance dans le microenvironnement local. Une expression dérégulée de protéases à sérine ancrées à la membrane, dont TMPRSS11A, a été associée à des altérations de la biologie des voies aériennes et des muqueuses, et a été étudiée dans le contexte de la physiopathologie épithéliale ainsi que du remodelage protéolytique lié au cancer.

TMPRSS11A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TMPRSS11A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TMPRSS11A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TMPRSS11A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TMPRSS11A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TMPRSS11A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TMPRSS11A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TMPRSS11A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TMPRSS11A dans les cellules tumorales présentant une expression de TMPRSS11A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.