Plasmide CRISPR d'Activation (h) TMEM97: sc-411997-ACT

TMEM97 code une petite protéine transmembranaire multipasse, également connue sous le nom de récepteur sigma-2, enrichie dans le réticulum endoplasmique ainsi que dans les membranes lysosomales/endosomales, et impliquée dans la gestion intracellulaire du cholestérol et le trafic membranaire. TMEM97 a été associée à la régulation de la répartition des stérols via des interactions avec des complexes de transport lipidique et des complexes récepteurs, influençant la dynamique vésiculaire et les réponses cellulaires au stress. Une expression altérée de TMEM97 a été rapportée dans des contextes prolifératifs et neurodégénératifs, où des modifications de l’homéostasie lipidique, du stress oxydatif et de la protéostasie peuvent contribuer à des phénotypes associés aux maladies. Ces caractéristiques font de TMEM97 une cible utile pour des études mécanistiques sur la signalisation régulée par les lipides, le fonctionnement des organites et les transitions d’état cellulaire.

TMEM97 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TMEM97 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TMEM97 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TMEM97 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TMEM97, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TMEM97. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TMEM97 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TMEM97 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TMEM97 dans les cellules tumorales présentant une expression de TMEM97 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.