Plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM70 (h): sc-412399

Présentation

TMEM70 code une protéine de la membrane interne mitochondriale nécessaire à l’assemblage et à la stabilisation corrects du complexe V de la phosphorylation oxydative (ATP synthase), contribuant à une production efficace d’ATP et au maintien de l’homéostasie énergétique mitochondriale. La perte ou le dysfonctionnement de TMEM70 perturbe la synthèse d’ATP couplée au gradient de protons, entraînant souvent une modification du potentiel de membrane mitochondriale, une altération de la fonction de la chaîne respiratoire et un remodelage métabolique compensatoire. TMEM70 constitue donc un point d’entrée utile pour étudier la biogenèse mitochondriale, la bioénergétique et la coordination mito-nucléaire dans les cellules humaines. Des variants pathogènes de TMEM70 ont été associés à des maladies mitochondriales autosomiques récessives, notamment une déficience du complexe V avec des phénotypes d’encéphalocardiomyopathie et de décompensation métabolique, ce qui motive des études mécanistiques dans des modèles cellulaires pertinents.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM70 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TMEM70 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TMEM70, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TMEM70 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TMEM70.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TMEM70 pour l'étude de la signalisation de TMEM70, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TMEM70 essentiels à la fonction de TMEM70
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TMEM70 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TMEM70 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TMEM70 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TMEM70. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TMEM70 plasmide HDR (h) et le TMEM70 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TMEM70 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TMEM70 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.