Plásmido Doble Nickase (h) TMEM66: sc-412236-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)TMEM66 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa TMEM66 (h) y el plásmido de doble nickasa TMEM66 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a SARAF. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) TMEM66 | sc-412236-NIC | 20 µg | $410.00 |
SARAF (factor regulador asociado a la SOCE), también conocido como TMEM66, es una proteína de membrana del retículo endoplásmico que modula la entrada de calcio operada por depósitos (SOCE) al interactuar con STIM1 y contribuir a la inactivación dependiente de Ca2+ de los canales Orai1. Al ajustar la señalización de calcio citosólico, SARAF influye en vías aguas abajo vinculadas con la expresión génica, la secreción, el metabolismo y la adaptación al estrés, incluidas la homeostasis del RE y la dinámica de la respuesta a proteínas mal plegadas. La desregulación de la SOCE y del manejo del calcio en el RE está implicada en múltiples procesos relevantes para enfermedades, como la proliferación aberrante, la activación alterada de células inmunitarias y la vulnerabilidad al estrés oxidativo y proteotóxico. Por lo tanto, SARAF/TMEM66 es una diana útil para estudios mecanísticos que conectan los flujos de calcio con decisiones de destino celular y con la reconfiguración de redes de señalización.
TMEM66 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SARAF en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SARAF. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SARAF. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SARAF alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.