TMEM65 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406584

Descripción general

TMEM65 codifica la proteína transmembrana 65, una proteína de membrana asociada a las mitocondrias implicada en el mantenimiento de la organización de la membrana mitocondrial interna y en el soporte de la fosforilación oxidativa. TMEM65 se ha vinculado con la bioenergética mitocondrial, la regulación del potencial de membrana y las respuestas celulares al estrés metabólico, influyendo así en la producción de ATP y la homeostasis de las especies reactivas de oxígeno. La alteración de la función de TMEM65 se ha asociado con fenotipos de disfunción mitocondrial y es relevante para estudios de tejidos con alta demanda energética, en los que una respiración deteriorada puede contribuir a mecanismos de enfermedad neuromuscular y cardiometabólica. Como componente de la vía mitocondrial, TMEM65 es útil para investigar la señalización mitocondrial, el control de calidad de los orgánulos y los programas transcripcionales adaptativos al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TMEM65 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TMEM65 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TMEM65 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TMEM65 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TMEM65.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TMEM65 para la investigación de la señalización de TMEM65, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TMEM65 críticos para la función de TMEM65
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TMEM65 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TMEM65 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TMEM65 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TMEM65. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TMEM65 (h) y el plásmido HDR TMEM65 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TMEM65 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TMEM65 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.