TMEM63A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-411328

Descripción general

TMEM63A codifica una proteína transmembrana de múltiples pasos que se propone que funcione como un canal iónico mecanosensible y osmosensible, conectando los cambios en la tensión de la membrana y el volumen celular con la homeostasis iónica. Se ha implicado en procesos relacionados con la mecanotransducción que influyen en la señalización intracelular, la excitabilidad de la membrana y la adaptación al estrés, con un posible crosstalk con vías dependientes del calcio. Los patrones de expresión y los estudios funcionales emergentes sugieren relevancia para la fisiología sensorial y para contextos neuronales o epiteliales en los que las señales osmóticas y mecánicas son prominentes. La desregulación de los programas de transporte de membrana y de mecanosensado se asocia ampliamente con trastornos neurológicos y de la homeostasis, lo que convierte a TMEM63A en una diana útil para investigar estos mecanismos en modelos celulares.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TMEM63A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TMEM63A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TMEM63A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TMEM63A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TMEM63A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TMEM63A para la investigación de la señalización de TMEM63A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TMEM63A críticos para la función de TMEM63A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TMEM63A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TMEM63A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TMEM63A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TMEM63A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TMEM63A (h) y el plásmido HDR TMEM63A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TMEM63A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TMEM63A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.