Plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM53 (h): sc-413194

Présentation

TMEM53 (protéine transmembranaire 53) code une petite protéine associée aux membranes, impliquée dans la régulation de la signalisation liée à l’enveloppe nucléaire et de l’homéostasie cellulaire. Des travaux récents relient TMEM53 à des voies contrôlant la signalisation BMP/SMAD et la régulation transcriptionnelle, suggérant un rôle dans la coordination de la transduction des signaux intracellulaires avec les réponses nucléaires. Une altération de la fonction de TMEM53 a été associée à des perturbations du développement squelettique et cranio-facial ainsi qu’à des phénotypes osseux apparentés, ce qui en fait une cible d’intérêt pour des études mécanistiques sur la différenciation ostéogénique et la biologie du développement. Son expression et sa localisation membranaire présumée plaident également pour l’étude des interactions entre organites, du trafic protéique et de la modulation des voies de signalisation dépendante du contexte.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM53 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TMEM53 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TMEM53, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TMEM53 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TMEM53.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TMEM53 pour l'étude de la signalisation de TMEM53, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TMEM53 essentiels à la fonction de TMEM53
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TMEM53 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TMEM53 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TMEM53 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TMEM53. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TMEM53 plasmide HDR (h) et le TMEM53 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TMEM53 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TMEM53 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.