Plasmide CRISPR d'Activation (h) TMEM45A: sc-412437-ACT

TMEM45A code une protéine transmembranaire multipasse impliquée dans la différenciation épithéliale et l’adaptation cellulaire aux stress du microenvironnement, avec un enrichissement rapporté dans les tissus hypoxiques et kératinisants. TMEM45A a été associée à la régulation du trafic membranaire et de programmes de réponse au stress influençant la prolifération, la survie et des processus liés à la fonction barrière. Des modifications transcriptionnelles de TMEM45A ont été observées dans de nombreux types de tumeurs, étayant son utilisation comme gène associé à des marqueurs dans des études sur le remodelage induit par l’hypoxie et les voies de réponse aux traitements. En tant que facteur localisé à la membrane et à expression dépendante du contexte, TMEM45A est fréquemment étudiée pour sa contribution à la plasticité des cellules tumorales et à l’hétérogénéité phénotypique.

TMEM45A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TMEM45A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TMEM45A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TMEM45A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TMEM45A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TMEM45A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TMEM45A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TMEM45A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TMEM45A dans les cellules tumorales présentant une expression de TMEM45A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.