TMEM192 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-415021-ACT

ヒトのTMEM192は、エンドリソソームの構造維持や小胞輸送に関与するとされる、リソソーム関連膜貫通タンパク質をコードしています。リソソーム膜への局在は、リソソームの完全性、カーゴの処理、ならびに細胞内のプロテオスタシスを維持するオートファジー–リソソーム経路の協調における役割を支持します。リソソーム機能は自然免疫シグナル伝達、代謝適応、ストレス応答にも影響するため、TMEM192活性の変化は、リソソーム依存的プロセスがしばしば破綻する神経変性、がん細胞の生存、炎症性表現型に関する研究において重要です。TMEM192の発現を操作することは、分解経路やシグナル伝達のクロストークに対するリソソーム中心の制御を解析するための実用的なアプローチとなります。

TMEM192 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TMEM192の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TMEM192 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TMEM192 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTMEM192転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TMEM192の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTMEM192遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTMEM192依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTMEM192発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTMEM192経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。