Plasmide Double Nickase (h) TMEM19: sc-412500-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TMEM19 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TMEM19 Double Nickase (h) et le plasmide TMEM19 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TMEM19. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) TMEM19 | sc-412500-NIC | 20 µg | $410.00 |
TMEM19 code une protéine transmembranaire prédite à passages multiples, qui se localise dans des compartiments membranaires intracellulaires et serait impliquée dans l’organisation des membranes et le trafic des protéines. Bien que ses partenaires moléculaires restent imparfaitement caractérisés, l’expression de TMEM19 a été associée à la régulation des programmes de croissance cellulaire et pourrait s’articuler avec des réseaux de signalisation coordonnant la prolifération et les réponses au stress. Des variations du niveau de transcription de TMEM19 ont été rapportées dans de multiples contextes pathologiques, notamment dans des signatures d’expression associées au cancer, ce qui appuie son intérêt comme modulateur potentiel de l’état cellulaire. Ces caractéristiques font de TMEM19 une cible pertinente pour des études mécanistiques de la régulation associée aux membranes et du dialogue entre voies de signalisation dans les cellules humaines.
TMEM19 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TMEM19 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TMEM19. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TMEM19. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TMEM19.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.