Plasmide CRISPR d'Activation (h) TMEM167B: sc-410050-ACT

TMEM167B code une protéine transmembranaire multipasse impliquée dans le trafic membranaire et l’organisation du système endomembranaire, avec un enrichissement rapporté dans des compartiments sécrétoires et vésiculaires. Des travaux récents relient TMEM167B à la régulation de processus d’homéostasie cellulaire tels que le tri des protéines et la signalisation associée aux organites, susceptibles d’influencer la disponibilité des récepteurs et la réactivité des voies de signalisation en aval. Des profils d’expression altérés ont été observés dans plusieurs jeux de données omiques, ce qui appuie la poursuite des recherches sur TMEM167B, notamment dans des contextes d’adaptation au stress cellulaire et de programmes de croissance dérégulés. En tant que protéine membranaire encore relativement peu étudiée, TMEM167B se prête bien à des recherches mécanistiques visant à cartographier des phénotypes dépendants du trafic et à identifier des interactions génétiques.

TMEM167B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TMEM167B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TMEM167B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TMEM167B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TMEM167B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TMEM167B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TMEM167B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TMEM167B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TMEM167B dans les cellules tumorales présentant une expression de TMEM167B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.