Plasmide CRISPR d'Activation (h) TM6SF1: sc-412251-ACT

TM6SF1 (membre 1 de la superfamille transmembranaire 6) est une protéine membranaire multipasse prédite, dont l’enrichissement dans les tissus métaboliques a été rapporté, ainsi que des liens avec la gestion des lipides et des processus de trafic associés aux membranes. Bien que son mécanisme moléculaire reste imparfaitement caractérisé, TM6SF1 a été associé à des voies cellulaires qui influencent l’homéostasie lipidique, notamment le métabolisme des lipoprotéines et l’organisation du système endomembranaire, pertinents pour la fonction des hépatocytes. Des variations ou une dérégulation de l’expression de TM6SF1 ont été rapportées dans des jeux de données liés à des phénotypes métaboliques, ce qui soutient l’exploration de son rôle dans la biologie hépatique et l’équilibre énergétique systémique. Ces caractéristiques font de TM6SF1 une cible utile pour étudier le contrôle transcriptionnel de programmes liés aux lipides et la fonction des protéines membranaires dans des modèles cellulaires humains.

TM6SF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TM6SF1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TM6SF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TM6SF1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TM6SF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TM6SF1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TM6SF1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TM6SF1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TM6SF1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TM6SF1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.