TLR3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400512-ACT

TLR3 (Toll-like-Rezeptor 3) ist ein endosomaler Mustererkennungsrezeptor, der doppelsträngige RNA erkennt, die während einer Virusinfektion gebildet oder aus geschädigten Zellen freigesetzt wird. Nach Ligandenbindung signalisiert TLR3 über den Adapter TRIF und aktiviert die IRF3/IRF7- und NF-κB-Signalwege, wodurch die Produktion von Typ-I-Interferonen und die Expression proinflammatorischer Zytokine angestoßen werden. Diese Achse der angeborenen Immunität prägt antivirale Restriktionsprogramme, die Reifung dendritischer Zellen sowie die Kommunikation mit der adaptiven Immunität. Eine fehlregulierte TLR3-Aktivität wird mit veränderter Wirtsabwehr und entzündlicher Pathologie in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt in Studien zur Interferon-Signalgebung, Neuroinflammation und Tumor-Immun-Interaktionen unterstützt.

TLR3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TLR3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TLR3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TLR3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TLR3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TLR3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TLR3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TLR3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TLR3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TLR3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.