Plasmide CRISPR d'Activation (h) TLR2: sc-400267-ACT

Le gène humain **TLR2** code le récepteur Toll-like 2, un récepteur de reconnaissance des motifs (PRR) qui détecte les lipoprotéines bactériennes et d’autres composants microbiens en coopération avec des partenaires hétérodimériques tels que **TLR1** et **TLR6**. Après liaison du ligand, **TLR2** transmet ses signaux principalement via des voies dépendantes de **MYD88**, activant des cascades **IRAK–TRAF6**, ce qui entraîne l’activation de la signalisation **NF-κB** et **MAPK** ainsi que l’induction de cytokines et de chimiokines pro-inflammatoires. L’activité de **TLR2** façonne l’activation de l’immunité innée, la maturation des cellules dendritiques et le dialogue avec l’immunité adaptative, avec des effets en aval sur les programmes liés à l’interféron et à l’inflammasome, de manière dépendante du contexte. Une signalisation **TLR2** dérégulée a été impliquée dans des affections inflammatoires chroniques, l’immunopathologie associée aux infections et l’inflammation associée aux tumeurs, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la régulation immunitaire.

TLR2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TLR2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TLR2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TLR2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TLR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TLR2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TLR2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TLR2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TLR2 dans les cellules tumorales présentant une expression de TLR2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.