TLR2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400267-ACT

ヒトTLR2はToll様受容体2（Toll-like receptor 2）をコードしており、TLR1やTLR6などのヘテロ二量体パートナーと協調して、細菌性リポタンパク質をはじめとする微生物成分を検知するパターン認識受容体です。リガンド結合後、TLR2は主としてMYD88依存性経路を介してシグナルを伝達し、IRAK–TRAF6カスケードを活性化することで、NF-κBおよびMAPKシグナル伝達を駆動し、炎症性サイトカインおよびケモカインの誘導を引き起こします。TLR2の活性は、自然免疫の活性化、樹状細胞の成熟、ならびに獲得免疫とのクロストークを形成し、状況依存的にインターフェロンやインフラマソーム関連プログラムにも下流影響を及ぼします。TLR2シグナル伝達の破綻は、慢性炎症性疾患、感染に伴う免疫病態、腫瘍関連炎症に関与することが示唆されており、免疫調節の機構研究における有用な標的となっています。

TLR2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TLR2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TLR2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TLR2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTLR2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TLR2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTLR2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTLR2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTLR2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTLR2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。