Particules Lentivirales d'Activation (h) Titin: sc-402827-LAC

Le gène humain **TTN** code la titine, une protéine échafaudage sarcomérique géante qui s’étend du disque Z à la ligne M et intègre l’élasticité mécanique à l’architecture des myofibrilles. La titine organise le positionnement des filaments épais, contribue à la tension passive via les domaines extensibles de la bande I et coordonne une signalisation mécanodépendante au niveau du disque Z et de la bande M grâce à des interactions avec des protéines telles que la téléthonine, l’obscurine et des complexes de kinases spécifiques du muscle. Par ses rôles dans l’assemblage du sarcomère, la transmission de la force et le contrôle de la qualité des protéines, **TTN** influence des voies comprenant la mécanotransduction, la dégradation via le système ubiquitine–protéasome et le remodelage adaptatif au stress dans le muscle strié. Les perturbations génétiques et fonctionnelles de **TTN** sont fortement associées aux cardiomyopathies et aux myopathies squelettiques, faisant de la régulation de la titine un axe majeur de la biologie musculaire et de la modélisation des maladies.

Les particules d'activation lentivirales Titin (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TTN dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Titin (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TTN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Titin. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TTN ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.