Plasmide CRISPR d'Activation (h) TIMP-4: sc-402560-ACT

TIMP4 code l’inhibiteur tissulaire des métalloprotéinases‑4 (TIMP‑4), un régulateur sécrété du renouvellement de la matrice extracellulaire (MEC) qui se lie à plusieurs métalloprotéinases matricielles (MMP) et les inhibe. En limitant le remodelage protéolytique, TIMP‑4 influence l’adhérence et la migration cellulaires ainsi que l’architecture tissulaire, en interagissant avec la signalisation MEC–récepteur et des voies dépendantes des protéases qui façonnent l’inflammation et les réponses angiogéniques. Une expression altérée de TIMP4 a été associée à un remodelage matriciel dérégulé observé en biologie cardiovasculaire, dans les processus fibrosants et dans la dynamique du microenvironnement tumoral. Son équilibre, dépendant du contexte, avec l’activité des MMP fait de TIMP‑4 un nœud utile pour étudier les programmes de remodelage et les phénotypes médiés par le microenvironnement.

TIMP-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TIMP4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TIMP-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TIMP4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TIMP4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TIMP-4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TIMP4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TIMP-4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TIMP-4 dans les cellules tumorales présentant une expression de TIMP4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.