Plasmide CRISPR/Cas9 KO TIMP-1 (h): sc-400408

Présentation

TIMP1 code l’inhibiteur tissulaire des métalloprotéinases 1 (TIMP‑1), une glycoprotéine sécrétée qui se lie aux métalloprotéinases de la matrice (MMP) et les inhibe afin de réguler le renouvellement de la matrice extracellulaire et la signalisation protéolytique. En limitant l’activité des MMP, TIMP‑1 influence les interactions cellule–matrice, le remodelage tissulaire et les réponses inflammatoires, avec des effets en aval sur la migration, l’invasion et les programmes de remodelage induits par les cytokines. TIMP‑1 est également impliqué dans une signalisation indépendante des MMP via des interactions à la surface cellulaire, susceptibles de moduler, selon le contexte, les voies de survie et de prolifération. Les altérations de l’expression de TIMP1 et de l’équilibre TIMP‑1/MMP sont fréquemment étudiées dans la fibrose, l’arthrite, le remodelage cardiovasculaire et la biologie du cancer, où une dynamique matricielle dérégulée contribue aux phénotypes associés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TIMP-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TIMP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TIMP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TIMP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TIMP-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TIMP1 pour l'étude de la signalisation de TIMP-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TIMP1 essentiels à la fonction de TIMP-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TIMP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TIMP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TIMP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TIMP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TIMP-1 plasmide HDR (h) et le TIMP-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TIMP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TIMP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.