Plasmide CRISPR/Cas9 KO TIM-3 (m): sc-431363

Présentation

Havcr2 code le récepteur immunorégulateur TIM-3, une protéine membranaire de type I exprimée par de multiples lignées immunitaires, notamment les lymphocytes T activés, les lymphocytes T régulateurs, les cellules dendritiques et certains sous-ensembles de l’immunité innée. TIM-3 intègre des signaux qui déterminent les seuils d’activation des lymphocytes T, la tolérance et la différenciation effectrice, influençant la production de cytokines et le fonctionnement de la synapse immunologique lors de la stimulation antigénique. Par ses interactions avec des ligands tels que la galectine-9 et la phosphatidylsérine, TIM-3 contribue à des voies associées au dysfonctionnement des lymphocytes T et à l’exposition antigénique chronique, ce qui le rattache aux programmes d’épuisement immunitaire et à la modulation des circuits inflammatoires. Dans les modèles murins, la biologie de Havcr2/TIM-3 est largement étudiée dans des contextes d’auto-immunité, d’infection chronique et d’immunologie tumorale afin de mieux comprendre l’homéostasie immunitaire et l’inflammation spécifique des tissus.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TIM-3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Havcr2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Havcr2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Havcr2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TIM-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Havcr2 pour l'étude de la signalisation de TIM-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Havcr2 essentiels à la fonction de TIM-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Havcr2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TIM-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TIM-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Havcr2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TIM-3 plasmide HDR (m) et le TIM-3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Havcr2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Havcr2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.