Plasmide Double Nickase (h) Thyroperoxidase: sc-402102-NIC

Le gène humain **TPO** code la thyroperoxydase, une glycoprotéine membranaire héminique localisée à la surface apicale des cellules folliculaires thyroïdiennes, qui catalyse des réactions clés d’iodation et de couplage nécessaires à la biosynthèse des hormones thyroïdiennes. En oxydant l’iodure et en favorisant la formation d’iodotyrosines sur la thyroglobuline, la TPO associe une activité enzymatique dépendante de l’état rédox au processus hormonogène à l’interface avec le colloïde thyroïdien. La fonction de la TPO est étroitement liée aux voies de prise en charge de l’iodure et de maturation de la thyroglobuline, contribuant à l’homéostasie endocrine via une production hormonale régulée. Une activité de la TPO dérégulée ou sa reconnaissance par le système immunitaire est associée à des dysfonctions thyroïdiennes et constitue un point d’entrée moléculaire pour l’étude des composantes auto-immunes et métaboliques des maladies de la thyroïde.

Thyroperoxidase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TPO dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TPO. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TPO. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TPO.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.