Thyroperoxidase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423484

Descripción general

El gen Tpo de ratón codifica la tiroperoxidasa (TPO), una enzima apical de membrana dependiente de hemo en las células foliculares tiroideas que cataliza la oxidación del yoduro y la yodación y el acoplamiento de la tiroglobulina para generar las hormonas tiroideas T3 y T4. La actividad de la TPO integra el transporte y la organificación del yoduro con el control redox mediante sistemas productores de H2O2 como DUOX/DUOXA, lo que sustenta la biosíntesis hormonal y la homeostasis del folículo tiroideo. La alteración de la hormonogénesis tiroidea dependiente de Tpo se asocia con cambios en la regulación metabólica y con fenotipos de crecimiento y neurodesarrollo en sistemas modelo, y ofrece puntos de entrada mecanísticos para el estudio de la patología tiroidea autoinmune, en la que la TPO es un antígeno principal. En consecuencia, Tpo sirve como un nodo funcional para estudiar programas de diferenciación tiroidea, la señalización de retroalimentación endocrina y las respuestas al estrés oxidativo en los tirocitos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Thyroperoxidase (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tpo en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tpo junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tpo tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Thyroperoxidase.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tpo para la investigación de la señalización de Thyroperoxidase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tpo críticos para la función de Thyroperoxidase
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tpo para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Thyroperoxidase CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Thyroperoxidase CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tpo. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Thyroperoxidase (m) y el plásmido HDR Thyroperoxidase (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tpo para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tpo definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.