Plasmide CRISPR/Cas9 KO TFPI-2 (m): sc-423362

Présentation

Tfpi2 code l’inhibiteur 2 de la voie du facteur tissulaire (TFPI-2), un inhibiteur de protéases à sérine de type Kunitz sécrété, qui module la protéolyse extracellulaire en inhibant des protéases telles que la plasmine et des enzymes de type trypsine. Dans les tissus murins, TFPI-2 contribue à réguler le renouvellement de la matrice extracellulaire, l’activité des protéases péricellulaires et les interactions cellule–matrice qui influencent l’adhésion, la migration et le remodelage tissulaire. En limitant les cascades protéolytiques liées à la coagulation et à la fibrinolyse et en interagissant avec le remodelage médié par les métalloprotéinases de la matrice, TFPI-2 participe à l’homéostasie vasculaire et stromale. Une expression ou une activité altérée de TFPI-2 a été associée à une dégradation déréglée de la matrice et à des phénotypes cellulaires invasifs pertinents pour la fibrose, les pathologies vasculaires et la biologie du cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TFPI-2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tfpi2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tfpi2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tfpi2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TFPI-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tfpi2 pour l'étude de la signalisation de TFPI-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tfpi2 essentiels à la fonction de TFPI-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tfpi2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TFPI-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TFPI-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tfpi2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TFPI-2 plasmide HDR (m) et le TFPI-2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tfpi2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tfpi2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.