Plasmide Double Nickase (h) TFIIIC110: sc-404261-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TFIIIC110 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TFIIIC110 Double Nickase (h) et le plasmide TFIIIC110 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GTF3C2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TFIIIC110 Antibody (2395C2a): sc-81406
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TFIIIC110 | sc-404261-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TFIIIC110 | sc-404261-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GTF3C2 code pour TFIIIC110, une sous-unité centrale du complexe TFIIIC qui reconnaît des éléments promoteurs internes dans les gènes transcrits par l’ARN polymérase III, notamment les ARNt et d’autres petits ARN non codants. En favorisant le recrutement de TFIIIB et l’assemblage du complexe de pré-initiation de Pol III, TFIIIC110 contribue à des programmes de transcription basale qui couplent le métabolisme des ARN à la croissance cellulaire et aux réponses au stress. TFIIIC intervient aussi dans l’organisation de la chromatine et l’architecture nucléaire, reliant les loci Pol III à des caractéristiques plus larges de la régulation du génome. Une dérégulation du contrôle transcriptionnel de Pol III et des sous-unités de TFIIIC a été associée à des états prolifératifs et à une homéostasie altérée des petits ARN, ce qui fait de GTF3C2 une cible utile pour des études mécanistiques de la transcription et de la régulation du génome.
TFIIIC110 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GTF3C2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GTF3C2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GTF3C2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GTF3C2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.