Plasmide CRISPR d'Activation (h) TFIIIC110: sc-404261-ACT

GTF3C2 code TFIIIC110, une sous-unité centrale du complexe TFIIIC qui reconnaît des éléments promoteurs internes et soutient la transcription, par l’ARN polymérase III, des ARNt, de l’ARNr 5S et d’autres petits ARN non codants. En coordonnant l’assemblage de TFIIIC et son couplage fonctionnel au recrutement de TFIIIB, TFIIIC110 contribue à la protéostasie, à la capacité de traduction et aux programmes d’adaptation au stress cellulaire qui dépendent de la production de Pol III. Les composants de TFIIIC participent également à l’organisation de la chromatine et à l’architecture du génome via leur liaison aux loci des gènes d’ARNt et à des sites régulateurs apparentés. Des altérations du contrôle transcriptionnel de Pol III et une dérégulation des sous-unités de TFIIIC ont été associées à des signalisations prolifératives et à des états oncogéniques, ce qui motive des études mécanistiques de GTF3C2 dans l’homéostasie transcriptionnelle et la régulation génique pertinente pour les maladies.

TFIIIC110 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GTF3C2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TFIIIC110 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GTF3C2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GTF3C2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TFIIIC110. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GTF3C2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TFIIIC110 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TFIIIC110 dans les cellules tumorales présentant une expression de GTF3C2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.