Plasmide CRISPR d'Activation (h) Tenomodulin: sc-401145-ACT

TNMD code la ténomoduline, une glycoprotéine transmembranaire de type II particulièrement abondante dans les tendons, les ligaments et d’autres tissus conjonctifs denses, où elle contribue à l’homéostasie de la matrice extracellulaire et à la maturation tissulaire. La ténomoduline est associée aux programmes de différenciation ténogénique et participe à la régulation de l’adhérence cellulaire, de la fibrillogenèse du collagène et des processus de remodelage, en interaction avec la signalisation profibrotique induite par le TGF‑β. Des modifications de l’expression de TNMD ont été liées à une cicatrisation tendineuse altérée, aux tendinopathies et à la dégénérescence du tissu conjonctif musculosquelettique ; TNMD est également fréquemment étudié en parallèle des voies liées à l’angiogenèse, en raison de l’activité anti‑angiogénique rapportée de certains domaines de la ténomoduline. Ces propriétés font de TNMD une cible utile pour étudier la spécification des lignées fibroblastiques, les réponses de remodelage proches de la mécanotransduction et la biologie de la matrice pertinente pour les maladies dans des modèles cellulaires humains.

Tenomodulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TNMD sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Tenomodulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TNMD dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TNMD, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Tenomodulin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TNMD natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Tenomodulin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Tenomodulin dans les cellules tumorales présentant une expression de TNMD silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.