Plasmide Double Nickase (h) TEL: sc-402207-NIC

ETV6 (TEL) code un facteur de transcription de la famille ETS qui agit principalement comme répresseur transcriptionnel, contrôlant le maintien des cellules souches et progénitrices hématopoïétiques, l’engagement de lignée et la prolifération homéostatique. TEL intègre des signaux de signalisation aux mécanismes de régulation de la chromatine via des interactions avec des corépresseurs et des complexes associés aux histones désacétylases, façonnant des programmes d’expression génique impliqués dans la différenciation et l’apoptose. La perturbation d’ETV6 contribue à l’instabilité génomique et à une altération du contrôle transcriptionnel, et ETV6 est fréquemment impliqué dans les hémopathies malignes via des translocations, des mutations ponctuelles et l’haplo-insuffisance. En tant que nœud central du développement sanguin et des fusions géniques leucémogènes, TEL est largement étudié pour son rôle dans les réseaux transcriptionnels oncogéniques et les voies de signalisation kinase aberrantes.

TEL Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ETV6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ETV6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ETV6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ETV6.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.