Plasmide CRISPR d'Activation (h) TEF-5: sc-403417-ACT

Le gène humain **TEAD3** code le facteur de transcription **TEF-5**, une protéine de liaison à l’ADN portant un domaine **TEA/ATTS** qui s’associe aux coactivateurs **YAP/TAZ** pour réguler des programmes géniques contrôlant la prolifération, la spécification de lignée et la croissance tissulaire. TEF-5 agit au sein du réseau de signalisation **Hippo**, en intégrant les signaux mécaniques et les contacts cellule–cellule afin de moduler des sorties transcriptionnelles telles que le remodelage de la matrice extracellulaire et la progression du cycle cellulaire. Une activité transcriptionnelle TEAD–YAP/TAZ dérégulée a été associée à des phénotypes oncogènes, à des voies liées à la fibrose et à des programmes développementaux altérés, faisant de TEAD3 une cible utile pour des études mécanistiques du contrôle transcriptionnel. L’expression et l’activité de TEAD3 sont donc pertinentes pour disséquer la régulation génique dépendante du contexte en biologie du cancer, au cours du développement des organes et lors des transitions d’état cellulaire.

TEF-5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TEAD3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TEF-5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TEAD3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TEAD3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TEF-5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TEAD3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TEF-5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TEF-5 dans les cellules tumorales présentant une expression de TEAD3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.