Plasmide CRISPR d'Activation (m) TDO2: sc-425274-ACT

Le gène murin **Tdo2** code la tryptophane 2,3-dioxygénase (TDO2), une enzyme hème‑dépendante qui catalyse la première étape, limitante en vitesse, du catabolisme du tryptophane via la voie de la kynurénine. En contrôlant la conversion du L‑tryptophane en N‑formylkynurénine, TDO2 influence la disponibilité cellulaire en tryptophane, la production en aval de métabolites liés au NAD⁺, ainsi que la signalisation immunométabolique liée au récepteur des hydrocarbures aromatiques (AhR) via la kynurénine. L’activité de **Tdo2** est étroitement associée à l’homéostasie métabolique hépatique et à l’équilibre systémique des acides aminés, avec des effets en aval sur les réponses au stress oxydant et les programmes inflammatoires. Un flux dérégulé de la voie de la kynurénine a été associé à une modulation immunitaire et à des phénotypes neuro‑inflammatoires, faisant de **Tdo2** une cible pertinente pour des études mécanistiques du dialogue métabolisme–immunité dans des modèles murins.

TDO2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Tdo2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TDO2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Tdo2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Tdo2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TDO2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Tdo2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TDO2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TDO2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Tdo2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.