Plasmide Double Nickase (h) TCP-1 ζ: sc-403047-NIC

CCT6A code la sous-unité humaine TCP-1 ζ (zêta) du complexe chaperonine TRiC/CCT, une machine de repliement dépendante de l’ATP qui favorise la maturation d’un large spectre de protéines cytosoliques. TRiC/CCT contribue à la protéostasie en promouvant le repliement correct de l’actine, de la tubuline et d’autres clients complexes à domaines multiples, influençant ainsi l’organisation du cytosquelette, la progression du cycle cellulaire et l’adaptation au stress. En modulant la stabilité et l’assemblage fonctionnel de protéines clés de signalisation et de structure, TCP-1 ζ relie le repliement médié par des chaperonnes aux voies qui gouvernent la prolifération et l’homéostasie cellulaire. La dérégulation des composants de TRiC/CCT, dont CCT6A, a été étudiée dans des contextes de déséquilibre de la protéostasie et de phénotypes de croissance aberrants pertinents pour la recherche sur le cancer et les maladies neurodégénératives.

TCP-1 ζ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CCT6A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CCT6A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CCT6A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CCT6A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.