Plasmide Double Nickase (m) TCF-1: sc-423299-NIC

Tcf7 code le facteur de transcription T cell factor 1 (TCF-1), un effecteur central de la signalisation canonique Wnt/β-caténine, qui se lie aux motifs TCF/LEF afin de réguler des programmes géniques contrôlant le développement des lymphocytes, des états de renouvellement de type « stem » et la spécification de lignée. Dans les cellules immunitaires murines, TCF-1 façonne la maturation des thymocytes et la différenciation des lymphocytes T périphériques en coordonnant l’accessibilité de la chromatine et des réseaux transcriptionnels intégrant des signaux des voies Wnt, Notch et des cytokines. Une activité dérégulée de TCF-1 a été impliquée dans des altérations de l’homéostasie immunitaire et des phénotypes inflammatoires, et ses rôles au niveau des voies de signalisation le rendent pertinent pour les études d’immunologie tumorale et de régulation hématopoïétique. En tant que régulateur nucléaire se liant à l’ADN, TCF-1 est également utilisé comme nœud pour interroger des circuits transcriptionnels spécifiques au contexte et le contrôle épigénétique dans des modèles de développement et de maladie.

TCF-1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Tcf7 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Tcf7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Tcf7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Tcf7.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.