Particules Lentivirales d'Activation (m) TBX5: sc-423282-LAC

Le gène murin **Tbx5** code **TBX5**, un facteur de transcription de la famille T-box qui se lie à des motifs d’ADN spécifiques de séquence afin de coordonner des programmes de régulation génique pendant le développement embryonnaire et la mise en place des tissus. TBX5 est un déterminant central de la morphogenèse cardiaque et de la spécification des membres antérieurs, en intégrant des réseaux transcriptionnels qui contrôlent la différenciation des cardiomyocytes, la formation des cavités et la maturation du système de conduction. Il agit de concert avec d’autres facteurs de lignée tels que **NKX2-5** et les protéines **GATA** pour réguler des enhancers contrôlant des gènes structuraux et électrophysiologiques. Un dosage ou une activité de TBX5 dérégulés sont associés à des malformations congénitales du cœur et des membres, ce qui en fait un nœud précieux pour étudier la régulation génique du développement et les relations génotype–phénotype dans des modèles murins.

Les particules d'activation lentivirales TBX5 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Tbx5 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TBX5 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Tbx5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TBX5. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Tbx5 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.