Plasmide CRISPR/Cas9 KO TBX5 (m): sc-423282

Présentation

Tbx5 code le facteur de transcription à domaine T-box TBX5, un régulateur se liant à l’ADN de manière spécifique aux séquences, qui coordonne des programmes géniques du développement contrôlant la mise en place du membre antérieur et la morphogenèse cardiaque chez la souris. TBX5 s’intègre à des réseaux transcriptionnels centraux impliquant NKX2-5, GATA4 et des facteurs de la famille MEF2 afin de moduler l’activité des enhancers et la spécification de lignages dans des tissus dérivés du mésoderme. Son activité influence des voies régissant la formation des cavités, le développement du système de conduction et la différenciation des cardiomyocytes, et une perturbation de la dose de Tbx5 est associée à des phénotypes de malformations congénitales du cœur et des membres. En tant que régulateur du développement aux cibles dépendantes du contexte, TBX5 est largement utilisé pour étudier le contrôle transcriptionnel de l’organogenèse et des décisions de destin cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TBX5 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tbx5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tbx5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tbx5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TBX5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tbx5 pour l'étude de la signalisation de TBX5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tbx5 essentiels à la fonction de TBX5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tbx5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TBX5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TBX5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tbx5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TBX5 plasmide HDR (m) et le TBX5 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tbx5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tbx5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.