Particules Lentivirales d'Activation (m) TBC1D20: sc-426458-LAC

Le gène murin Tbc1d20 code TBC1D20, une protéine d’activation de la GTPase Rab (Rab GAP) contenant un domaine TBC, qui régule le trafic membranaire en accélérant l’hydrolyse du GTP sur certaines protéines Rab. TBC1D20 se localise principalement au réticulum endoplasmique et contribue à l’homéostasie du RE, à l’organisation de la voie sécrétoire et aux dynamiques de transport Golgi–RE qui façonnent la gestion des lipides et la morphologie des organites. Par ces fonctions, elle influence des processus tels que l’arrimage et la fusion des vésicules, le tri du cargo et le maintien de l’identité des compartiments intracellulaires. La dérégulation du trafic dépendant des Rab et de la fonction du RE est pertinente pour l’étude du stress métabolique, de la neurobiologie et de la protéostasie cellulaire, faisant de Tbc1d20 un point d’entrée utile pour l’analyse de voies dans des modèles murins.

Les particules d'activation lentivirales TBC1D20 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Tbc1d20 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TBC1D20 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Tbc1d20, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TBC1D20. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Tbc1d20 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.