Particules Lentivirales d'Activation (m) TBC1D15: sc-426147-LAC

Le gène murin Tbc1d15 code TBC1D15, une protéine d’activation des GTPases Rab (Rab GAP) contenant un domaine TBC, qui contribue à la régulation du trafic membranaire et de la dynamique des organites. TBC1D15 a été associée au contrôle de la morphologie mitochondriale et des contacts mitochondries–lysosomes, reliant le transport vésiculaire à la mitophagie et, plus largement, aux voies d’autophagie. Via un trafic dépendant des Rab et l’élimination d’organites endommagés, TBC1D15 peut influencer le métabolisme cellulaire, les réponses au stress et les programmes de contrôle qualité. La dérégulation de la dynamique mitochondriale et de l’autophagie est au cœur de nombreux processus pertinents pour les maladies, notamment la neurodégénérescence, l’inflammation et les dysfonctionnements métaboliques, ce qui fait de Tbc1d15 une cible utile pour des études mécanistiques dans des modèles murins.

Les particules d'activation lentivirales TBC1D15 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Tbc1d15 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TBC1D15 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Tbc1d15, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TBC1D15. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Tbc1d15 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.