Plasmide Double Nickase (m) TBC1D15: sc-426147-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) TBC1D15 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TBC1D15 Double Nickase (m) et le plasmide TBC1D15 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Tbc1d15. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) TBC1D15 | sc-426147-NIC | 20 µg | $410.00 |
Tbc1d15 code pour TBC1D15, une protéine activatrice de l’activité GTPasique des Rab (Rab GAP) impliquée dans le contrôle du trafic membranaire intracellulaire et de la dynamique des organites. Dans les cellules de souris, TBC1D15 a été associée à l’homéostasie mitochondriale, notamment à la régulation de la morphologie et du renouvellement des mitochondries, et elle s’interface avec des voies gouvernant l’autophagie/la mitophagie ainsi que le transport endolysosomal. En modulant des étapes de trafic dépendantes des Rab, TBC1D15 peut influencer les réponses au stress cellulaire et l’adaptation métabolique. La dérégulation de ces processus est pertinente pour des travaux sur la neurodégénérescence, l’inflammation et la biologie des cellules cancéreuses, où des altérations du contrôle qualité mitochondrial et du trafic vésiculaire contribuent à des mécanismes pathogènes.
TBC1D15 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Tbc1d15 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Tbc1d15. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Tbc1d15. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Tbc1d15.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.