Plásmido CRISPR de Activación (h) TAP: sc-402586-ACT

El NXF1 humano codifica TAP, un receptor central de exportación de mRNA que acopla la transcripción y el procesamiento del pre‑mRNA al transporte a través del poro nuclear mediante la formación de un heterodímero con NXT1 y la interacción con nucleoporinas a través de repeticiones FG. TAP se une a complejos adaptadores como TREX y reconoce características de los mRNP para promover una exportación nuclear eficiente, influyendo así en la expresión génica global, la vigilancia del RNA y el acoplamiento del splicing a la exportación. A través de su papel en la regulación de la composición y la disponibilidad citoplasmática de los mRNA, NXF1/TAP impacta vías que incluyen el metabolismo del RNA, el control de la traducción y programas de expresión génica sensibles al estrés. La desregulación de la maquinaria de exportación de mRNA se ha asociado con alteraciones de la homeostasis del transcriptoma observadas en contextos de cáncer y enfermedades neurodegenerativas, lo que convierte a NXF1 en un objetivo relevante para estudios mecanísticos del transporte de RNA y la fidelidad de la expresión génica.

TAP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NXF1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TAP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NXF1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NXF1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TAP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NXF1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TAP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TAP en células tumorales con expresión de NXF1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.